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可行性报告
早香柚皮药用功能成分的提取及光谱分析测定研究
1、立项的背景和意义
早香柚为芸香科柑橘亚科柑桔属植物,主要分布于浙南与闽东一
带,为我国柚类优良产品。浙江省永嘉县是我国早香柚的发源地和主
产区,早香柚种植面积达亩,产量吨。早香柚不仅是美食果品,而且
是天然的中医良药保健食品。目前,早香柚主要用于鲜食,产品附加
值低,柚皮中的生物活性成分得不到充分利用,所以研究早香柚不同
组织部位,不同时期从未成熟到采后贮藏主要活性成分的含量的变化
及其提取物的抗氧化性,可以为早香柚及其果皮的深加工提供理论依
据。柚皮中柚皮苷的含量占到其总黄酮含量的80%以上,它除了具有
抗氧化、抗衰老、抗癌等药理作用外,还可以在食品工业中可作为天
然色素,风味改良剂和苦味剂用于食品和饮料的生产,也可作为合成
新型甜味剂二氢柚苷查儿酮的原料。所以,从柚皮中提取柚皮苷,可
以使柚皮变废为宝,提高早香柚的附加值。
永嘉县碧莲早香柚系历史传统名产,曾连续五次获全国柚类品质
评比金杯奖,连续三次荣获中国农业博览会民牌产品称号。该品种有
三个特点:一是成熟特早,于10月上中旬采摘上市,比同类其他柚
提早成熟一个月左右;二是品质优良,营养丰富,果皮散发浓郁芳香,
室内放置2-3个果实,便使满室溢香。早香柚果实美观,呈葫芦形,
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平均果重1000克左右,果色橙黄,果面油饱光滑,果肉脆嫩化渣,
汁液多,甜多酸少,清香可口。成熟特早,果色橙黄,果面油胞光
滑,果肉脆嫩化渣、汁液多、甜多酸少、清香可口。
永嘉早香柚,又称香抛,是柚的一种,其果形呈梨形端正、果色
橙黄、果面光滑、果肉脆嫩化渣、汁液多、甜多酸少、清香爽口等优
点。据测定,果汁中可溶作性固形物占14.18%,总糖10.46%,还行
乞修道原糖4.16%,可滴定酸0.85%,维生素c含量55.82/100毫升,
糖分含量高于文旦,果肉可食率达52.6%,而且果肉组织紧密,同瓤
瓣壁极易分离,故有“天然罐头”之美誉。平均单果量为1180克,大
小适中。其是目前国内最早成熟的柚类良种之一,而且极耐贮藏,存
之次年春,其味更甜腻。
早香柚母株高达七米左右,树冠紧凑,树强壮,叶片宽厚,平均
株产量125~150公斤,最高株产可达250千克。碧莲香柚9月上旬
果面有三分之一转色,9月中旬全部变橙黄色,9月下旬即收上市。
它比沙田橙、楚门文旦提早上市一个左右,是目前国内最早成熟的柚
类良种。肉质多甜少酸,风味浓郁,质地松脆,有爽口清香,无苦味
等优点。据测定,果汁中可溶作性固形物占14.18%,总糖10.46%,
还行乞修道原糖4.16%,可滴定酸0.85%,维生素c含量55.82/100
毫升。糖分含量高于文旦,果肉可食率达52.6%。而且果肉组织紧密,
同瓤瓣壁极易分离。平均单果量为980克,且大小适中。碧莲香柚果
形美观,呈梨形,外观商品价值较高,而且耐贮藏,存之次年春,其
味更甜腻,故有“天然罐头”之美誉。
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早香柚药用价值也很高,具有舒气、镇喘等疗效。患有哮喘或
高血压的人,常食对身体大有裨益。柚子皮,中医上称为“王瓜皮”,
能破积消食,治喘行气。柚子果,是永嘉民间流传很广的土单药方,
对治疗积食、痢疾等有奇效。永嘉早香柚是国内目前最早成熟的柚类
品种,国庆左右即可上市。早香柚不仅外形漂亮,而且口味独特,吃
起来甜中略带酸,没有苦味,果肉松脆,还有股浓郁的香味,具有很
高的营养价值,维生素c含量居果中之冠。
2、国内外研究现状和发展趋势
柚(Citrusgrandis(L.)Osbeck)为芸香科柑桔属植物,是桔属的三
个基本种之一。柚子盛产于我国东南及南方,浙江、广东、广西、福
建、四川、湖南等省都有柚树栽培的悠久历史。优良品系有广东梅县
的沙田柚、浙江苍南的四季柚、漳州坪山柚、垫江白柚、梁平柚、江
津红心柚等二三十个品种。我国柚类种植面积和产量均居世界首位,
柚子资源的开发利用具有巨大的潜力。据测定,柚果实中除含有多种
人体健康必需的营养成分如多种氨基酸、胡萝卜素、硫胺素、核黄素、
抗坏血酸、烟酸、钙、铁、磷等外。还含有多种对人体健康具有促进
作用及对一些疾病有防治作用的非营养性生理活性成分,即所谓的植
物化学成分(phytoehemicals),如柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素
芸香苷、类柠檬苦素、胰岛素类似物、酚酸、香精油等,并且这些成
分在柚果皮中的含量明显高于可食部分(贾冬英等,2001)。因此,柚
果皮具有更高的保健及药用价值。传统中医认为,柚皮具有止咳、化
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痰、理气、抗炎、止痒等功效。现代医学研究表明,柚皮提取物具有
抗氧化、抗衰老、抗癌、抗微生物、抑酶、降血糖、降血压、预防动
脉粥样硬化等活性(Tripoli。tal.,2007)。柚皮中富含的多种植物化学
成分是柚皮产生这些生理调节和药理作用的主要成分。从柚皮中提取
这些物质,不仅能变废为宝,提高柚子的生产价值,而且,当将提取
出来的有用物质添加到食品中时,又能提高食品的营养价值,具有良
好保健功能。显然,对早香柚进行综合利用开发是具有实用意义的。
我国柚类种植面积和产量均居世界首位,柚子资源的开发利用具
有巨大的潜力。早香柚是浙江省的特色水果,国内外对早香柚的生物
学特性、栽培技术和地质背景等方面的研究较多,而对其果实生物活
性成分分析方面的研究较少,本试验只是对早香柚功能成分的初步研
究,还有许多方面需要深入研究。早香柚果实在生长发育过程中各个
成分的变化变化规律包括营养元素和生物活性成分在果实生长过程
中的合成代谢规律,早香柚中生物活性成分随生长期的变化在不同组
织里消长规律和转化途径。早香柚不同贮藏方法树藏,冷藏,气调贮
藏等对其果实性状和生物活性物质的影响,及果实性状与生物活性成
分变化的关系。
3、研究开发内容和技术关键
一、研究早香柚皮中药用功能成分的组成
二、对早香柚皮中药用功能成分的提取方法及工艺研究。
三、研究、探索光谱法测定早香柚皮中药用功能成分总黄酮的方法,
优化方法各项参数,建立光谱法测定早香柚皮中主要功能成分。
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四、研究超声波辅助提取早香柚皮中主要功能成分的较优工艺
技术关键:食品抗氧化剂能防止食物氧化变质,它在食品加工中被广
泛应用,但大多数为合成产品,如BHA、BHT等。合成抗氧化剂具有很
多副作用,对人体的健康造成很大的危害。现在,如何用天然抗氧化剂
代替合成抗氧化剂是许多食品科技工作者关注的问题。尚待开发的天
然食品抗氧化剂主要存在于植物体中的多酚化合物、黄酮类化合物
(黄酮、黄烷酮、异黄酮等)、肉桂酸衍生物、香豆素和多官能团的有
机酸等。本研究主要是从永嘉县碧莲早香柚的柚子皮中提取具有抗氧
化作用的黄酮类化合物。为今后工业化生产天然抗氧化剂提供良好的
原料。黄酮类化合物是植物经光合作用产生的一大类化合物,是以黄
酮(2-苯基色原酮)为母核的一类黄色色素,其中包括黄酮的同分异构
体(异黄酮)及其原产物(黄烷酮)。黄酮类化合物广泛分布在植物界中,
在植物的叶子和果实中少部分以游离形式存在,大部分与糖结合成苷
类以糖配基的形式存在。柚皮中主要是5,7,4—三羟基黄酮,在7位
碳上是新橙皮苷(柚皮苷)。早香柚主要功能成分天然黄酮类化合物,
按照它们的分子结构分为六类:黄酮类(navones),黄烷酮类
(flavanones),黄酮醇类(flavonols),异黄酮类(isoflavones),花色素类
(anthocanidins),儿茶素类(catechins)(Petersonetal.,1995),(如图所
示)。迄今为止从柑橘中鉴定出的类黄酮单体有60多种,均属于前
五大类,其中黄酮醇类也只有在柠檬中含有一部分,而花色素类主要
存在于血橙中。根据柑橘属中的黄酮类化合物的结构特征,可分为以
下四类(Tripolietal.,2006):黄烷酮糖营配基(Flavanoneaglyeone),
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黄酮和黄酮醇糖苷配基(Flavanoneaglyeone),黄烷酮新橙皮糖苷
(Flavanoneneohesperidoside),黄烷酮芸香糖苷(Flavanonerutinside)。
除此之外,还有多甲氧基黄酮(叶兴乾,2005;唐传核,2004),虽然含
量很少,但它有很多特殊作用。它可以作为柑橘分类的标识物;因为
多甲氧基黄酮与植物自身防御机制有关,它还具有抗病毒抗菌等重要
的药理作用。柑橘中的多甲氧基黄酮较常见的有川陈皮素(Nobiletin),
柑橘黄酮(Tangeritin)和甜橙黄酮(Sinentin)。
图1黄酮类化合物的分子结构
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关于早香柚主要功能成分黄酮类物质含量的测定主要有:紫外可
见分光光度法、HPLC法、荧光光度法等。HPLC法和荧光光度法需
要昂贵的设备;紫外可见分光光度法操作简便、检测成本低,但它要
求物质组成要单一,而总黄酮提取液组成复杂,虽经分离,但其中仍
含有难于分离的干扰性杂质,影响测定的准确度。为了克服提取液中
杂质强吸收带来的干扰,我们拟采用超声波辅助提取-双波长紫外可
见分光光法对早香柚主要功能成分进行测定。
4、预期目标(主要技术经济指标、知识产权申请情况、应用前景)
a:提取天然黄酮类化合物应用于医药每年可以创造1000万的效益。
b:早香柚主要功能成分天然黄酮类化合物柚皮苷,全称为柚皮素一
一新橙皮糖苷,是一种二氢黄酮类化合物,它在柚皮中含量丰富,占
到柚皮总黄酮含量的一半以上。柚皮苷具有抗氧化、抗衰老、抗癌、
抗微生物、抑酶、降血糖、降血压、预防动脉粥样硬化等药理作用,
在医药和化妆品领域得到广泛应用。除此之外,柚皮苷还可以在食品
工业中可作为天然色素,风味改良剂和苦味剂用于食品和饮料的生
产,也可作为合成新型甜味剂二氢柚苷查儿酮的原料。所以,从柚皮
中提取柚皮苷,可以使柚皮变废为宝,提高柚子的附加值。
C:研究成果将在国内外高质量的学术刊物上发表学术论文2篇以
上。
5、研究方案、技术路线、组织方式与课题分解
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早香柚主要功能成分传统提取方法有热水提取法,碱提酸沉法,
溶剂萃取法。热水提取,仅限于提取苷类,但因提取杂质多,故不常
使用碱提酸沉法中碱的浓度不好控制,在强碱条件下加热,黄酮类化
合物的母核会被破坏,酸性过大会形成佯盐,溶剂提取法中最常见的
是乙醇一水提取黄酮类物质,提取效果虽优于前两种,不过比较耗时,
超声波辅助提取技术是一种新的提取分离技术,具有高效、增产、节
能等特点。近年来,超声提取的研究在提取生物活性物质中取得较大
的进展,它主要是利用超声的非热作用一机械作用和空化作用。超声
波在介质传播过程中,引起介质质点加速度增大,这也就加大了溶剂
进入提取物细胞的渗透性,从而强化了提取过程。而当空化作用产生
时,在固液非均相体系的界面发生的气泡爆破,破坏了植物的细胞壁,
再加上碰撞次数增多、物质交换次数也就增多,细胞膜的透过能力得
到增强,使萃取的效率提。
本实验以乙醇为萃取溶剂,利用超声波技术,通过单因素和正交
试验,对柚皮中柚皮苷提取率的影响因素进行研究,并优化超声提取
的工艺条件,为今后工业化生产提供参考。
组织方式与课题分解主要由项目组成员协商确定。课题负责人全
面负责项目的实施和与企业间的技术交流,发现每个环节可能出现的
问题并进行处理解决。其他成员主要对实验进行过程中的技术进行指
导,负责对光谱仪器性能和参数等的调试以及消化处理实验和分析测
试,主要针对企业生产的早香柚皮进行检测和工艺改造以及负责企业
实际实施。完成企业的实验检测和数据收集。这样,在大家共同努力
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下,团结一致,一定能够完成计划项目。
6、计划进度安排
2010.07-2010.12:研究早香柚皮中主要功能成分的组成
2011.01-2011.12:对早香柚皮中主要功能成分总黄酮的提取方法及
工艺研究。
2012.01-2012.06:研究、探索光谱法测定早香柚皮中主要功能成分
总黄酮的方法,优化方法各项参数,建立光谱法
测定早香柚皮中主要功能成分。完成结题工作。
7、现有工作基础及条件
本项目组主要研究人员多年从事有机化学、分析化学、食品分析
等方面的科学研究,获得国家、省、市多项科研成果。近几年来,已
发表各种论文五十多篇,其中SCI收录的学术论文有二十多篇,EI
十来篇。具有丰富的理论和实践研究经验。现我中心拥有美国安捷伦
公司高效液相及液-质连用仪,以及其他紫外可见分光光度计、超声
波等大型分析仪器,完全可以满足本项目的实施。
8、经费预算
项目所需材料、药品、试剂和检测费及能源消耗费12万元,实
验设计3万元,信息收集费3万元,会议调研费3万元,验收费1万
元,人员劳务费4万元,其他费用4万元。合计30万元,向科技局
申请30万。
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