负染色法，便于电子显微镜观察式样的方法

基本介绍

负染色法 negative staining的染色处理过程主要并非针对菌体本身，故又称“衬托染色法”。是一种易于在电子显微镜下观察试样的微细结构的方法。它是用磷钨酸钠、醋酸氧铀等电子密度高的物质，嵌入生物试样的间隙，根据产生的对比进行观察，而非原来意义上的物质染色。它与通常在电子显微镜中所得的阳面物像不同，而是阴面物像，因而有此名称。解像力可达0.5微米以下。

最早由S.Brenner和R.Horne，（1959）用于病毒粒子的观察，以后利用此法很快地积累了病毒、细菌以及分层蛋白质的微细结构等方面的知识。

负染色法需要使用酸性染料来染色，如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电，而酸性染料的色原也带负电，所以色原只能将背景染色。没有染色的细胞在染色背景下就能很容易的观察到。在负染色法中，标本不需要热固定，细胞不会因为化学药物的影响而变形，对于不易染色的细菌或病毒也能观察。

负染色法 此种染色法之染色处理过程主要并非针对菌体本身，故又称「间接染色法」。所用之染剂系因阴离子呈色，所以无法对同样带阴电荷之菌体细胞呈色，而于染色处理时会在细胞周围形成沉淀，这种情形即称为阴性或间接染色。

又称背景染色法

原理：

背景染色需用酸性染料如伊红或苯胺黑。因细菌体表带负电荷，而酸性染料之呈色原（ chromogen ）也带负电荷，故不能渗入细胞内。背景染色之实际应用有二，一为标本不需以热固定，细胞不至因化学药物之影响而变形，可观其自然之大小与型态，二乃可借以观察不易染色之细菌如螺旋菌。

材料：

试剂

苯胺黑染色液

器材

酒精灯（或本生灯）、接种环、染色盘、玻片、拭镜纸及显微镜。

步骤：

取一小滴苯胺黑染色液，滴于洁净玻片之一端。

以无菌操作取一接种环之培养，置入苯胺黑染色液中，混匀。

取另一玻片（或盖玻片）其一端置于苯胺黑色液之前，并呈 30 度状态，向他端推去，使混和液成一薄涂膜。

将玻片置空气中干燥，不宜以热固定。

以油镜观察之。